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针刺内关、足三里等穴对大鼠孤束核神经元放电的影响

【摘要】  目的 通过比较针刺内关、足三里等穴对正常大鼠孤束核(nucleus tractus solitarii, NTS)神经元放电的影响,阐明NTS在内关、足三里穴共同调节心、胃功能中的作用。方法 运用细胞外记录神经电生理学方法,观察针刺内关、足三里等穴时NTS神经元放电频率的变化。结果 NTS内神经元对针刺刺激主要以呈兴奋性反应为主;针刺内关、足三里穴组, NTS内兴奋性神经元出现率与针刺偏历、合阳穴组比较有显著性差异(P<0.01);针刺内关、足三里穴组兴奋性神经元频率变化率亦显著高于针刺偏历、合阳穴组(P<0.01)。结论 NTS是针刺内关、足三里穴共同调节心胃功能的整合中枢之一;经穴具有相对特异性。

【关键词】  内关穴/针刺效应;足三里穴/针刺效应;孤束核;大鼠 

    〔Abstract〕 Objective To compare the differences between acupuncture in points Neiguan and Zusanli on neuronal discharges of the nucleus of the solitary tract (NTS) in normal rats, and investigate regulating actions on cardiac and gastric functions with NTS in the two points. Method The neurons discharges in NTS, induced by acupuncture in acupoints Neiguan and Zusanli, were measured with extracellular recording techniques. Results Neurons in NTS was reacted mainly as the excitatory response after the acupuncture; The incidence of the neurons irritability in NTS on acupuncture in Zusanli and Neiguan groups was significantly different compared with acupuncture in Pianli and Heyang groups(P<0.01); The frequency changes of the excitatory neurons in Zusanli and Neiguan groups were also obvious higher than those in Pianli and Heyang groups(P<0.01). Conclusion NTS is one of integrated nervous center regulating the functions of heart and stomach with acupuncture in Neiguan and Zusanli and the acupont has the relative specific effect on that.

    〔Key words〕 Neiguan acupoints; Zusanli acupoints; acupuncture effect; nucleus of the solitary tract    内关、足三里穴分属手厥阴心包经和足阳明胃经,均善治心血管系统及胃的病症,既可调节本经所属脏(腑)的功能,又有共同调节心胃功能的作用,与心、胃之间存在某种相关性。根据神经生物学理论,穴位对内脏功能活动的调节是以节段性、节段间和脊髓上的作用为基础的。形态学的研究表明,内关穴的传入神经元主要位于C6-T1,足三里穴的传入冲动主要投射至T6-S3,而支配心脏的交感传入神经元位于T1-T4(T5),胃的支配节段为T5-T9。可以看出,心与足三里、胃与内关均不在相同或相邻的神经节段。这种不同神经节段支配的内脏和穴位之间的联系,脊髓上中枢的作用尤为重要。本研究通过观察针刺内关、足三里等穴对正常大鼠孤束核(NTS)神经元放电的影响,旨在阐明NTS在内关、足三里穴共同调节心胃功能中的作用。

    1 材料与方法

    1.1  材料

    1.1.1  动物  体质量250~300 g的Sprague Dawley(SD)雄性大鼠30只,清洁级,由中国中医科学院实验动物中心提供。

    1.1.2  仪器  大鼠脑立体定位仪(日本N.Takahashi);微电极推进器、操纵器(PF5-1,日本光电);微电极放大器(MEZ-8301,日本光电);生物放大器(AB-621G,日本光电);双线记忆示波器(VC-10,日本光电);电刺激器(SEN-7203,日本光电);隔离器(SS102J,日本光电);玻璃微电极拉制仪(Model P-97,美国);冰冻切片机(CM1850,德国莱卡);307-6台式牙钻车(307-6,上海)。

    1.2  方法

    1.2.1  动物分组  共分为4组。即①针刺足三里穴组;②针刺内关穴组;③针刺偏历穴组;④针刺合阳穴组。

    1.2.2  穴位定位  按照中国针灸学会实验针灸研究会1992年制定的《实验动物穴位定位标准》及拟人对照法。①“足三里”穴(腓骨小头下约5 mm处);②“内关”穴 (前肢下1/6折点处外侧,桡、尺骨缝中);③“偏历”穴(前肢下1/4折点处桡骨外侧);④“合阳”穴(腘窝正中下约3 mm处)。

    1.2.3  针刺方法  穴位针刺由专人操作,均采用1寸毫针,施以平补平泻捻转手法,捻转角度为360°,频率120次/min。

    1.2.4  玻璃微电极制备  在P-97微电极拉制仪上拉制玻璃微电极,尖端直径1 μm左右,测定微电极直流电阻应为10~30MΩ,记录前灌冲2.0%醋酸滂胺天蓝电极液。

    1.2.5  实验步骤  在室温条件下,大鼠称重后,用10%乌拉坦(urethane,1.0~1.2 g/kg)腹腔注射麻醉。切开大鼠头部皮肤,钝性剥离骨膜,暴露前囟,用牙钻车于前囟后约13.8 mm处,正中线左右旁开约1.0 mm处各凿一小孔;随后将大鼠固定在脑立体定位仪上,上齿钩挂在鼠头夹中,口鼻部用鼠头夹压紧。在手术显微镜下小心剥离硬脑膜和软脑膜。按照Paxions-Watson大鼠脑图谱[1],NTS坐标位置:AP 13.3~14.3 mm;L 0~1.8 mm;H 3.7~5.4 mm,在手术显微镜下插入玻璃微电极至脑表面,随即以石蜡油覆盖以防止干燥及减少脑波动对微电极位置的影响。在微电极推进器下,以1 μm/s的速度推进玻璃微电极,在3.7~5.4 mm深度中遇到神经元放电即立刻停止推进。待NTS内自发性放电神经元放电稳定2 min以上后,先连续记录30 s放电脉冲数作为对照值,然后针刺某一穴位30 s,同步记录神经元放电,去除手针,待其恢复或接近对照值水平后再针刺下一穴位。为排除针刺穴位顺序对神经元放电结果的影响,以针刺的四个穴位为1区组,采用4×4拉丁方设计进行针刺操作。即第1个神经元的针刺顺序为内关、足三里、偏历、合阳穴;第2个神经元的针刺顺序为足三里、偏历、合阳、内关穴;第3个神经元的针刺顺序为偏历、合阳、内关、足三里穴;第4个神经元的针刺顺序为合阳、内关、足三里、偏历穴,依次类推。神经元放电记录结束后,用刺激器通过隔离器经微电极放大器向玻璃微电极通以20 μA的逆向直流电,将玻璃微电极内的醋酸滂胺天蓝电极液导入脑组织以标记记录位置。切片后确认正确的记录位点,位置不符合者资料弃之不用。

    1.2.6  记录软件  神经元放电的信号经放大器放大,输入给Power-Lab/4s生理数据采集分析系统,Chart 4.2软件(澳大利亚)进行数据处理。

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