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正常绒毛和葡萄胎中Mel-CAM标记中间型滋养细胞的增殖情况
正常绒毛和葡萄胎中Mel-CAM标记中间型滋养细胞的增殖情况

 作者:安瑞芳,谢丽,王姝,张晨

【摘要】  目的 探讨葡萄胎中Mel-CAM与滋养细胞黏附、浸润之间的关系以及Mel-CAM标记中间型滋养细胞(IT)的增殖情况。方法 采用双重免疫组化法,检测Mel-CAM标记IT的Ki-67表达情况。结果 葡萄胎中Mel-CAM表达较正常绒毛明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);葡萄胎绒毛表面有Mel-CAM标记IT出现,而正常绒毛表面则无;葡萄胎组织中IT的Ki-67指数较正常绒毛明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 葡萄胎绒毛表面有Mel-CAM表达,表现出双重分化方向,这可能与葡萄胎的发病机制有关;检测葡萄胎组织中IT的Ki-67指数对于预测葡萄胎的转归有潜在的价值。

【关键词】  黑素瘤细胞黏附分子;中间型滋养细胞;Ki-67;葡萄胎

  ABSTRACT: Objective  To explore the relationship between Mel-CAM and adherence and invasion of trophoblastic cells and proliferation of Mel-CAM defined intermediate trophoblast. Methods  Double immunohistochemical staining technique was used to detect the expression of Ki-67 in Mel-CAM defined intermediate trophoblast in human villi during the first trimester and hydatidiform mole. Results  In this study there was a significantly stronger expression of Mel-CAM in hydatidiform mole than that in first-trimester villi (P<0.05). The expression of Mel-CAM in hydatidiform mole was observed on the surface of villi, but not in human villi. The Ki-67 index of hydatidiform mole was higher than that it of human villi with a significant difference (P<0.05). Conclusion  Mel-CAM might play an important role in the invasion of trophoblastic cells. The different differentiation type of villous trophoblast in hydatidiform mole and the first-trimester villi may be correlated with pathogenesis. The Ki-67 index of intermediate trophoblast has a potential value in predicting prognosis of hydatidiform mole.

  KEY WORDS: melanoma cell adhesion molecule; intermediate trophoblast; Ki-67; hydatidiform mole

  中间型滋养细胞(intermediate trophoblast, IT)是正常胎盘和妊娠滋养细胞疾病(gestational trophoblastic disease, GTD)中一类特殊的滋养细胞类型。随着研究的深入,逐渐认识到IT是一类独立的细胞类型,有自身特殊的免疫组织化学和生物学特征,并且IT的独立增生可以形成胎盘部位滋养细胞肿瘤(placental site trophoblastic tumor, PSTT)、超常胎盘部位(exaggerated placental site, EPS)、胎盘部位结节(placental site nodule, PSN)和上皮样滋养细胞肿瘤(epithelioid trophoblastic tumor, ETT)等多种良、恶性疾病。但是,由于IT的细胞形态学特征介于合体滋养细胞(syncytiotrophoblast, ST)和细胞滋养细胞(cytotrophoblast, CT)之间,给研究工作带来了极大的困难。随着IT的特异性标记物Mel-CAM的发现,使得IT的研究跨入了一个新的阶段。因此,本研究中利用Mel-CAM标记IT,研究其在正常绒毛和葡萄胎中的增殖情况,以期对IT与疾病的关系有更进一步的了解。

  1  对象与方法

  1.1  研究对象

  选择1995年1月至2000年12月间西安交通大学医学院第一附属医院的葡萄胎(hydatidiform mole, HM)组织标本30例作为研究组,患者年龄22-50岁,平均32岁。选择2000年门诊正常早期妊娠(6-12周)人流术后绒毛组织标本20例作为对照组。

  1.2  主要试剂

  鼠抗人Mel-CAM及Ki-67单克隆抗体均为北京中山金桥生物技术有限公司产品。

  1.3  标本的制备及免疫组化染色

  取上述葡萄胎患者首次清宫组织标本及正常早期妊娠绒毛组织标本,多聚甲醛固定,石蜡包埋,常规切片,切片厚5 μm。用双重免疫组化的方法先进行Ki-67的染色,DAB显色;然后做Mel-CAM染色,AEC显色。阴性对照:用相邻切片对照染色,以PBS代替第一抗体作为阴性对照。阳性对照:用已知阳性绒癌组织切片做Me l-CAM的阳性对照,乳腺癌组织切片做Ki-67的阳性对照。

  1.4  结果判断

  ①Mel-CAM标记IT的比例。每张切片观察10个高倍视野(×400),每个高倍视野计数100个滋养细胞,计算其中Mel-CAM阳性染色细胞所占的比例。阳性细胞数<25%为阴性(-),25%-50%为弱阳性(+),50%-75%为阳性(),>75%为强阳性()。②Ki-67标记指数。每张切片观察10个高倍视野(×400),每个高倍视野计数100个中间型滋养细胞,计算其中Ki-67阳性核的IT的百分比。

  1.5  统计学方法

  所有资料采用SPSS13.0软件分析。资料为等级计数资料,采用Kruskal-Wallis秩和检验,双侧P<0.05为有统计学意义。

  2  结果

  2.1  Mel-CAM的表达

  Mel-CAM表达仅见于IT,表现为均匀一致的线性染色包绕于整个IT表面。ST和CT无表达,蜕膜、内膜腺体和基质炎症细胞对Mel-CAM均为阴性表达。IT的Mel-CAM染色不仅表达在单核IT中,多核IT表面也可见表达,展示了一个IT变化的系列形态(图1、图2)。这可能显示了从CT向ST转变的一个中间阶段。无论在正常绒毛还是葡萄胎组织中,所有的Mel-CAM阳性细胞的染色强度无明显差异。
   
  在正常绒毛表面未见Mel-CAM表达,滋养细胞柱和浸润蜕膜的部分绒毛外IT中可见染色。这种染色模式在一定程度上反映了细胞滋养细胞在绒毛表面和绒毛外的不同分化途径,以及不同类型滋养细胞的生物学特点。

    在葡萄胎组织的Mel-CAM阳性染色不仅出现在绒毛外IT,绒毛表面也有滋养细胞的表达(图1-图4)。葡萄胎组织中Mel-CAM染色的阳性细胞比例较正常绒毛组织染色明显增加,二者间差异有统计学意义(P<0.05)。

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