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抵抗素、C反应蛋白与早期2型糖尿病微血管病变的关系

 作者:成淑英,荆爱玉,杨春燕,马建全,袁晓红,陈波

【摘要】  目的 探讨2型糖尿病(T2DM)患者血浆抵抗素、血清C反应蛋白(CRP)水平与早期T2DM微血管病变的相关性。方法 选取60例临床确诊的T2DM患者,按有无微血管并发症分为微血管并发症组 (DMA组)和无微血管并发症组(NDC组),每组30例。另选取24例同期体检的健康志愿者作为对照组(NC组)。采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验测定3组的血浆抵抗素含量,散射免疫比浊法测定血清CRP含量,放射免疫分析法测定胰岛素,氧化酶法测定血糖,全自动生化分析仪检测血脂。结果 ①DMA组血浆抵抗素、血清CRP含量均高于NDC组及NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。②Pearson(或Spearman)相关分析显示,血浆抵抗素与空腹胰岛素(FIns)、糖化血红蛋白(HbA1c)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)呈正相关(r分别为0.582、0.433、0.435、0.342、0.485,P均<0.05),与空腹血浆葡萄糖(FPG)、甘油三酯(TG)、体质指数(BMI)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)均无相关性;血清CRP与尿微量白蛋白(UALb)、血浆抵抗素、HOMA-IR、FIns、HbA1c呈正相关(r分别为0.388、0.240、0.283、0.279、0.318,P均<0.05),与HDL-C呈负相关(r=-0.235,P<0.05)。结论 血浆抵抗素、血清CRP可能与2型糖尿病微血管病变的发生、发展有密切关系

【关键词】  抵抗素;2型糖尿病;微血管病变;C反应蛋白

  ABSTRACT: Objective To investigate the relationship between plasma resistin and serum C-reactive protein (CRP) levels, with early microangiopathy in patients with type 2 diabetes mellitus (T2DM). Methods  According tomicroangiopathy, 60 patients with T2DM were divided into microangiopathy (DMA) group and non- complication (NDC) group. There were 24 healthy persons in the control group (NC). Enzyme-linked immunosorbent assay was used to determine the content of resistin, immunoturbidimetric method was used to determine the content of CRP, radio immunoassary was used to determine the content of insulin, oxydase was used to determine the content of fasting plasma glucose, and automatic analytical instrument was used to determine blood fat on the 84 subjects. Results  ① Compared with those in NDC group and NC group, the levels of plasma resistin and serum CRP were significantly increased in DMA group (P<0.05). ② In the 60 cases of T2DM, resistin level was positively correlated with FIns, HbA1c, HOMA-IR, TC, and LDL-C (r=0.582, 0.433, 0.435, 0.342, 0.485, respectively, P<0.05); resistin level had no correlation with FPG, TG, BMI or HDL-C CRP level was positively correlated with UALb, resistin, HOMA-IR, FIns, and HbA1c (r=0.388, 0.240, 0.283, 0.279, 0.318, 0.024, respectively P<0.05) but negatively correlated with HDL-C (r=-0.235, P=0.045). Conclusion  The present study shows plasma resistin and serum CRP may play an important role in the occurrance and development of microangiopathic in type 2 diabetic mellitus.

  KEY WORDS: resistin; type 2 diabetes mellitus; changes microangiopathy; C-reactive protein

  抵抗素是一种血浆蛋白,富含半胱氨酸和丝氨酸,属于抵抗素样分子(resistin like molecules, RELMs)家族[1],在齿啮类可诱发胰岛素抵抗(IR)。研究显示,在肥胖及存在IR的齿啮类和人的循环血中抵抗素水平均升高[2-3]。Reilly等[4]的研究发现,血浆抵抗素水平与炎症标记物相关,可预测人类冠状动脉硬化症的发生,并独立于C-反应蛋白(CRP),可能是代谢信号、炎症及动脉硬化之间的重要联系因子。CRP是标记亚临床炎症反应的重要介质。临床及流行病学研究均认为CRP可以很好地预测2型糖尿病(T2DM)的发生。有关抵抗素、CRP与血管病变的研究在大血管并发症方面较多,而对于其与糖尿病早期微血管病变的相关性临床研究较少。本研究通过对初诊的无并发症的T2DM患者及合并有早期糖尿病肾病(DN)、糖尿病视网膜病变(DR)Ⅰ-Ⅲ期的T2DM患者进行抵抗素、CRP含量的检测,观察抵抗素、CRP与早期T2DM微血管病变的相关性,为合理治疗及预防提供有益的参考。

  1  对象与方法

  1.1  研究对象

  收集2007年1月至7月在西安市铁路医院内分泌科及西安交通大学医学院第二附属医院内分泌科门诊及病房经临床确诊的60例T2DM患者(1999年WHO诊断标准)。其中微血管并发症组(DMA组)30例,男19例,女11例,平均年龄(56.64±12)岁,包括有早期DN及DRⅠ-Ⅲ期者。入选标准:早期DN患者尿白蛋白排泄率(UAER)20-200 μg/min;DRⅠ-Ⅲ期诊断以专科医师查眼底及眼底荧光造影结果为准。无微血管并发症组(NDC组)30例,男20例,女10例,平均年龄(51.0±8.9)岁,排除患有急慢性感染、肝肾功能不全、心功能不全、原发性肾炎、肾小球疾病、甲亢及其他自身免疫性疾病,排除使用胰岛素、降脂药、胰岛素增敏剂者及合并大血管并发症者。对照组(NC组)为24例同期健康体检的健康志愿者,男13例,女11例,平均年龄(52.12±7.97)岁。三组在年龄、性别、血压、体质指数(BMI)等方面的比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

  1.2  方法

  1.2.1  实验试剂和仪器
 
  ①主要试剂:人抵抗素酶联免疫试剂盒(批号A1010A0156,96T,灵敏度0.5 μg/L、美国Phoenix公司);CRP试剂盒(美国BECKMAN COULTER公司);胰岛素检测试剂盒(北京福瑞生物工程公司)。②仪器:KHB ST-360自动多功能酶标仪;日立7170型全自动生化分析仪;BECKMAN全自动生化免疫分析仪;GC-12100γ放射免疫计数器;普通离心机;低温冰箱。

  1.2.2  实验方法、步骤及检测内容
 
  ①所有实验对象均在空腹12 h以上于清晨抽取肘静脉血,其中空腹血浆葡萄糖(FPG)、餐后2 h血浆葡萄糖(2 h PG)、空腹胰岛素(FIns)及餐后2 h胰岛素(PSI)在西安交通大学医学院第二附属医院内分泌实验室行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)加同步胰岛素释放试验(所用试剂为统一批号),结果以该实验室正常值标准为准。②在BIO-RAD D-10型糖化血红蛋白仪(美国)上用高效液相法测糖化血红蛋白(HbA1c),用日立7170型全自动生化分析仪检测血脂。③抵抗素测定:收集静脉血3 mL,2 h内进行离心分离,分离抗凝血浆置于-80 ℃低温冰箱保存,待标本收集全后采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA法)测定抵抗素,步骤严格按照说明书进行。应用KHB ST-360自动多功能酶标仪在450 nm处测定吸光度值,绘制标准曲线,得出曲线方程。实验标本抵抗素含量的计算采用ELISA Calc回归拟合计算程序-v 0.1软件(由抵抗素试剂盒厂家提供)进行。④CRP的测定:收集1 mL静脉血,2 h内离心分离,收集血清置于-20 ℃低温冰箱,在西安交通大学医学院第二附属医院检验中心免疫室BECKMAN全自动生化免疫分析仪上采用免疫散射比浊法测定。⑤胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)采用稳态模型评估法,HOMA-IR=FPG×FIns/22.5。

  1.3  统计学处理

  正态性数值变量以均数±标准差(x±s)表示;胰岛素抵抗指数(作对数转换后符合正态分布)及抵抗素数据(偏态分布)均以M(QR)表示。应用SPSS 13.0统计软件包作数据处理,依据数据的不同组间比较采用方差分析、非参数检验、Spearman及Pearson相关分析,检验水准为0.05。

  2  结果

  2.1  抵抗素、CRP及其他所测实验数据的分析

  DMA组的血浆抵抗素、血清CRP含量均显著高于NDC组及NC组,差别具有统计学意义(P<0.05);NDC组的抵抗素、CRP含量稍高于NC组,但差别无统计学意义(P>0.05,表1)。表1  三组临床及实验室检测指标的比较(略)

  2.2  DMA组和NDC组抵抗素、CRP与其他检测指标的相关性分析

  经Pearson 或(Spearman)相关分析显示:①血浆抵抗素与FIns、HbA1c、HOMA-IR、TC、尿微量白蛋白(UALb)、LDL-C呈正相关,与FPG、TG、BMI、HDL-c均无相关性。②CRP与UALb、血浆抵抗素、HOMA-IR、FIns、HbA1c呈正相关,与HDL-C呈负相关(表2)。表2  DMA组和NDC组抵抗素、CRP与检测指标的相关分析(略)

  3  讨论
   
  近年有关T2DM发病机制的炎症学说备受关注,认为糖尿病是一种自然免疫和低度炎症性疾病[5]。已有研究表明,炎症标记物纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)、CRP、白介素-6(IL-6)等在T2DM患者血中含量均有增高[6]。作为脂肪因子之一的抵抗素,最初被认为来源于脂肪细胞,而新近的研究认为其可能不直接来源于脂肪细胞,或许更直接起源于渗透入脂肪组织的炎症细胞,其释放似乎受到了炎症因子内毒素(LPS)、IL-6、高血糖以及生长激素及性激素的刺激[7-8]。Osawa等[9]发现,血清抵抗素水平在T2DM伴有DR、DN及神经病变者中明显升高,并与DR、DN及神经病变的进展相关。Axelsson等[10]关于抵抗素的基因多态性与肾功能下降之间的关系的研究得出:与正常对照组比较,当肾功能损害严重时血清抵抗素水平显著升高,在肾功能损害一般时抵抗素中等程度升高。本实验得出DMA组患者血浆抵抗素、血清CRP含量均明显高于NDC组和NC组。这与上述研究及孙福敦、王瑾等[11-12]的结果一致,即在T2DM患者体内抵抗素、CRP含量是增加的,尤其是合并有早期微血管并发症者含量较高。

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