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生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠黏膜形态学的影响

                  作者:蔡莹,蔡光先,刘柏炎,杨辉,谢勇 

【摘要】  目的 观察生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠黏膜形态学的影响。方法 选用雄性昆明种小鼠,随机分为正常组、空白对照组、生晒参汤剂组、生晒参超微饮片全剂量组(含生药2.5 g/kg)及生晒参超微饮片1/2剂量组(含生药1.25 g/kg),采用利血平法制备脾虚动物模型,分别给予生理盐水、生晒参超微滤液及生晒参传统汤剂,造模及给药后处死小鼠,取小肠空肠段作光镜HE染色观察小鼠小肠黏膜形态改变,电镜观察小肠超微结构变化。结果 用药后生晒参超微饮片全剂量组能明显改善脾虚小鼠小肠上皮微绒毛,改善细胞质和细胞器结构,有显著的修复作用。结论 生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠黏膜的修复作用优于生晒参传统汤剂。

【关键词】  生晒参;超微饮片;脾虚模型;小肠黏膜;形态学;小鼠

    〔Abstract〕 Objective To investigate the effect of ultramicro-pieces of dry Radix ginseng on mucosal morphology of small intestine in the spleen deficiency in mice. Methods The male mice were divided into 5 groups as normal group,blank group,dry ginseng decoction group,normal dosage group with ultramicro pieces ginseng and 1/2 dosage group with the pieces; The models of spleen deficiency were prepared with reserpinum method and fed with saline,the liquid of the ultramicro-pieces and decoction of dry ginseng; And then,all the mice were killed and the morphological and ultramicro-structure changes of their jejunum were observed with electro-scope. Result The epitheliochorial cell and the structure of both cytoplasm and organelle were improved obviously in spleen deficiency in group with ultramicro-pieces ginseng. Conclusion the ultramicro-pieces of dry ginseng is more effective than the traditional dry ginseng pieces in repairing actions on mucous membrane of small intestine in mice.

    〔Key words〕 dry radix ginseng; ultramicro piece; model of spleen deficiency; mucous membrane of small intestine; morphology; morphology; mice

    脾虚证是中医常见证型,可见于消化系统多种疾病,现代研究表明,中医的脾本质是以消化系统为主的多系统功能综合单位,脾虚主要表现在小肠功能的改变[1]。小肠既是药物吸收的主要场所,又是脾虚证主要病变部位,且人参具有益气健脾之功效。基于此,本研究旨在观察生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠黏膜形态学的影响。

    1 材料与方法

    1.1  材料

    1.1.1  动物  健康雄性昆明种小鼠,清洁级,体质量(20±2) g,由湖南中医药大学实验动物中心提供,合格证号:医动字号20-002。

    1.1.2  药物  购置生晒参药材,由湖南省中药超微工程技术中心检测合格后,按有关工艺分别加工为超微和传统饮片。传统饮片第1次煎加水500 mL,煎汁150 mL,第2次煎加水300 mL,煎汁150 mL,将两次煎液混匀;超微饮片先60 ℃开水1 000 mL搅拌,静止10 min,纱布过滤取上清液,再加水1 000 mL,如前取上清液,两次煎液混匀。将传统饮片及超微滤液分别浓缩成每毫升含生药1 g,冷藏备用。

    1.1.3  试剂与仪器  利血平注射液,广东邦民有限公司产(批号:040620,规格:1 mL/mg);BX-51光学显微镜(日本Olympus公司),8800型超薄切片机(LKB公司), H-600透射电镜(日立公司)。

    1.2  方法

    1.2.1  动物分组与造模  将小鼠随机分为5组,分别为正常组、空白对照组、生晒参汤剂组、生晒参超微饮片全剂量组(含生药2.5 g/kg)及生晒参超微饮片1/2剂量组(含生药1.25 g/kg)。除正常组外,余4组采用利血平法制备脾虚动物模型[2],即按皮下注射利血平0.25 mg/mL每天1次,连续注射14 d。

    1.2.2  给药方法  模型制备成功后,空白对照组灌胃生理盐水20 mL/(kg·d),生晒参汤剂组、生晒参超微饮片全剂量组均灌胃含生药2.5 g/kg(按成人70 kg体质量每次服用10 g折算2倍量给药),生晒参超微饮片1/2剂量组灌胃含生药1.25 g/kg,连续给药12 d。

    1.2.3  观察方法  造模及给药后分别脱颈处死小鼠,取小肠空肠段,经0.01 mol/L PBS冲洗后,作光镜、电镜观察。

    1.2.4  光镜标本制备  处死动物后,取空肠1 cm组织,4%多聚甲醛固定24 h,常规脱水,沿纵轴方向石蜡包埋,切片HE染色,光镜观察。

    1.2.5  透射电镜标本制备  样品经2.5%戊二醛固定后,0.1 mol/L PBS漂洗,1%锇酸后固定,0.1 mol/L PBS漂洗,丙酮逐级脱水(浓度为50%、70%、90%、100%)后,Epon812环氧树脂与100%丙酮1∶1比例浸泡,Epon812环氧树脂浸泡、包埋,LKB公司8800型超薄切片机切片,醋酸铀、硝酸铝双重染色后,日立H-600透射电镜观察。

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