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金纳多合阿米洛利对大鼠肝纤维化模型的干预作用

                       作者:刘凌云,左和宁,杨伟峰

【摘要】  目的 观察银杏叶提取物金纳多合阿米洛利对大鼠肝纤维化模型的干预作用。方法 以二甲基亚硝胺造成大鼠肝纤维化模型,分别观察金纳多与阿米洛利干预后,羟脯氨酸、透明质酸及层粘连蛋白含量的变化。结果 各给药组(除阿米洛利组外)大鼠肝功能均较模型组有明显改善;阿米洛利和金纳多给药组较模型组的血清透明质酸、层粘连蛋白和肝组织羟脯氨酸含量降低(P<0.05);肝组织内SOD较模型组升高,而MDA低于模型组(P<0.01);金阿合用组效果最佳。结论 金纳多(银杏叶提取物)与阿米洛利对二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化模型均有预防作用,两者合用有一定的协同作用。

【关键词】  金纳多;银杏叶提取物;阿米洛利;肝纤维化;二甲基亚硝胺;大鼠

     目前认为,肝纤维化可以预防和逆转。近年来,已有不少学者以干扰肝纤维化形成过程中某一因素来干扰肝纤维化的发展,取得了一定成绩。由于肝脏纤维化的发生发展是一个复杂的过程,有诸多因素参与,因此仅干扰其中某一因素效果并不理想。新近关于肝纤维化形成机制的研究表明氧应激和交换泵在肝纤维化形成中起重要作用[1,2],为抗肝纤维化的研究提供了新靶点。本实验通过建立二甲基亚硝胺诱导的肝纤维化模型,观察联用Na+/H+交换泵抑制剂阿米洛利(Amiloride)与抗氧化剂银杏叶提取物金纳多[3](Ginaton)联用对大鼠纤维化形成的影响,以探索临床抗肝纤维化的新途径。现将实验方法及结果报道如下。

    1 材料与方法

    1.1  材料

    1.1.1  动物  雄性SD大鼠,体质量(180±30)g,购于湖南中医学院实验动物中心,合格证号:SCXK(湘2002-003)。

    1.1.2  药物  阿米洛利,1 g/瓶,购自Sigma公司;金纳多(银杏叶提取物),5 g/瓶,由德国威玛舒培大药厂生产;二甲基亚硝胺,100 mL/瓶,购于TCI公司。

    1.1.3  仪器  752-紫外分光光度计上海第三分析仪器厂,LD5-2A离心机北京仪器厂,AA-160型电子天平德国Denver公司,SN-862型放射免疫γ计数器上海分析仪器厂。

    1.1.4  试剂  超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)试剂盒为南京建成生物制品公司产品;透明质酸(HA)和层粘连蛋白(LN)放免试剂盒购自上海海军生物医学研究所。

    1.2  方法

    1.2.1  动物分组与造模  模型建立参照文献[4]。雄性SD大鼠60只,体质量150~210 g,随机分为6组,即正常组、模型组、阿米洛利组、金纳多组、金纳多+阿米洛利组(简称金阿合用组)、马络替酯组,每组10只。其中模型组及给药组每周连续3 d腹腔注射二甲基亚硝胺10 mg/kg,共3周;各给药组造模同时每日分别经胃灌注阿米洛利(1 mg/kg)、金纳多(40 mg/kg)、金阿合用组(与单用组浓度相同),共用药3周;马络替酯组造模同时每日经灌胃马洛替酯[5](90 mg/kg);正常对照组每周连续3 d腹腔注射生理盐水,共3周,同时每日灌胃生理盐水共3周。第4周初,摘眼球采血后处死动物,剪下完整肝脏组织标本,称肝质量后取部分中叶肝脏以10%中性甲醛固定,3 d内石蜡包埋,备病理检测;将余下肝脏于液氮中速冻,备肝组织匀浆测组织MDA、SOV、羟脯氨酸、透明质酸及层粘连蛋白,血清于-70 °C冰箱内保存备肝功能检测。

    1.2.2  肝功能、脂质过氧化指标检测  MDA、GSH-PX、 SOD HA及LN均按试剂盒说明测定。肝组织羟脯氨酸测定参照李文才等[6]的方法。

    1.3  统计学分析

        计量资料以均数±标准差(x±s)表示, 用统计软件SPSS10.0进行单因素变量的方差分析和最小差值显著法(LSD)的两两比较。

    2 结果

    2.1  一般情况 

    正常对照组大鼠一般状态良好;模型组活动少,皮毛欠光滑,尿色黄,有腹泻。各给药组大鼠精神活跃,毛发光滑,体型丰满,无腹泻。

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