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HPLC法测定广东土牛膝中腺苷的含量

                         作者:卢绮雯,李坚,萧鹏,谢艳婷

【摘要】  目的 测定广东土牛膝中腺苷的含量。方法 采用反相高效液相色谱法,色谱柱:DiamonsilTM C18柱,流动相:甲醇磷酸盐缓冲溶液(体积比12∶88),流速:1. 0 mL·min-1 ,检测波长260 nm,柱温30 ℃。结果 腺苷的平均回收率为99.5%,RSD值为1.69%;方法精密度试验RSD值为1.15%(n=6)。结论 该法可用于广东土牛膝中腺苷的含量测定。

【关键词】  广东土牛膝;腺苷;HPLC;含量测定

  Abstract:Objective To determine the content of adenosine in Radix Eupalorri Chinense Linn by RPHPLC. Methods  Samples were analyzed on a DiamonsilTM C18 column(250 mm×4.6 mm,5 μm) using  CH3OHNaH2PO4·Na2HPO4(12∶88)as mobile phase. The flow rate was 1.0 mL·min-1 and the detection wavelength 260 nm. Results The method exhibited good linearity from 0.0396 to 0.6336 μg. The average recovery for adenosine was 99.5% and RSD 1.69% (n=6).Conclusion  The method could be used to determine adenosine content in Radix Eupalorri Chinense Linn.

  Key words:Radix Eupalorri chinense Linn; adenosine; RPHPLC
     
  广东土牛膝(Radix Eupalorri Chinense Linn)为菊科植物华泽兰的干燥根及根茎,广东土牛膝资源丰富,分布较广,在民间沿用历史悠久,具有清热解毒、凉血利咽、抗炎镇痛的功效[1,2],临床上常用于治疗各种咽喉炎、扁桃腺炎等。为评价广东土牛膝的内在质量,本文以腺苷为指标成分[3],建立了广东土牛膝中腺苷含量测定的高效液相色谱法,该法具有分离效果好,简便、准确等优点,可用于该药材的初步质量控制。

  1仪器和试药

  1.1仪器
   
  日本岛津高效液相色谱仪 (LC10ATvp溶剂输送泵,SPD10Avp紫外可见检测器,CTO10Asp柱温箱),HW2000色谱工作站(南京千谱软件公司)。

  1.2药材来源及处理
     
  土牛膝样品(批号20051102,东莞国药集团中药饮片有限公司,产地广东;批号20060109,东莞国药集团中药饮片有限公司,产地广东;批号0500201,佛山康泰和医药有限公司中药饮片加工厂,产地广东),由广东药学院生药学教研室刘基柱副教授鉴定为菊科泽兰属植物华泽兰(Eupalorri chinense Linn)的根及根茎。将其粉碎,于60 ℃下干燥4 h,置干燥器内备用。

  1.3药品与试剂
   
  腺苷对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号879-200202,供含量测定用);甲醇为色谱纯,水为双蒸水,磷酸二氢钠和磷酸氢二钠均为分析纯。

  2实验部分

  2.1溶液的制备

  2.1.1供试品溶液
     
  取本品粉末(过3号筛)约1 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%(体积分数)的甲醇20  mL,称定重量,超声处理45 min,放冷,再称定重量,用50%(体积分数)甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,取续滤液即得。

  2.1.2对照品溶液
     
  精密称取腺苷对照品9.90 mg,置50 mL量瓶中,加50%(体积分数)的甲醇适量,振摇使溶解,再加50%(体积分数)的甲醇稀释至刻度,摇匀,得浓度为198 μg· mL-1的腺苷对照品贮备液。

  2.2色谱条件及系统用性试验
      
  色谱柱:DiamonsilTM(钻石) C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm,迪马公司);流动相:甲醇磷酸盐缓冲溶液[取0.01 mol·L-1磷酸二氢钠68.5 mL与0.01 mol·L-1磷酸氢二纳31.5 mL混合(pH=6.5)] (体积比12∶88);流速:1.0 mL·min-1,检测波长:260 nm;柱温:30 ℃。分别取对照品溶液(腺苷浓度为7.92 μg· mL-1),供试品溶液20 μL注入色谱仪,按上述色谱条件,记录色谱图(图1,2)。腺苷和样品中相邻色谱峰的分离度大于1.5;理论塔板数以腺苷峰计算不低于3 000;保留时间约为17.40 min。

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