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不同产地血竭凝血和抗血小板聚集作用的比较

【摘要】  目的 考察不同产地血竭在凝血和抗血小板聚集方面的作用。方法 采用毛细血管法测定凝血时间,体内血小板致聚剂——胶原和肾上腺素诱导小鼠血瘀模型。结果 不同产地血竭对正常小鼠的凝血功能均有一定的抑制作用,可较明显抑制小鼠对血小板致聚剂诱发的血小板聚集作用。结论 国产血竭和进口血竭均有一定的活血化瘀和抗血栓形成的作用。

【关键词】  血竭;凝血时间;血小板致聚剂

  Abstract:Objective To assess the activity in blood clotting and antiplatelet aggregation of dragon blood from different habitats.Methods Capillary method was used to get clotting time and congestive mice model induced with collagen protein and epinephrine hydrochloride was used.Results Dragon blood from different habitats have some inhibitory actions on blood clotting of healthy Kunming mice,platelet aggregation induced by platelet activation was also inhibited obviously.Conclusion Dragon bloods from China and abroad have some effects on promoting blood circulation,removing blood stasis and anti-thrombosis.

  Key words:Dragon blood;clotting time(CT);platelet aggregation

  血竭(dragon blood)是珍贵的中药传统品种之一,主要来源于棕榈科麒麟竭及百合龙血树属龙血竭,进口的血竭主要为棕榈科麒麟血竭。国产龙血竭与进口棕榈科的血竭相比,在化学成分上有较大差异,国产血竭对血液系统、心血管系统有较强的药理作用[1-3] 。本研究的目的是以凝血时间和抗血小板聚集反应为指标,比较不同产地血竭凝血和抗血小板聚集作用,为进一步研究国产血竭替代进口血竭在血液方面的作用机制提供理论依据。

  1  实验材料

  1.1  药品与试剂  广西、云南、印尼、龙王、柬龙5种产地血竭原料,购于市场,由广东药学院药科学院天然药物化学教研室吕华冲副教授鉴定,自处理:用95%乙醇索式提取,所得醇溶物干燥,按血竭醇溶物∶泊洛沙姆∶聚乙二醇4 000(质量比为1∶2∶1),乙醇溶剂熔融法制备成固体分散体;  地奥心血康,成都地奥制药集团有限公司,批号060611;  复方丹参片,广州白云山和记黄埔中药有限公司(原广州白云山中药厂),批号20051025;  盐酸肾上腺素注射液,北京市永康药业有限公司1 mL∶1 mg,批号05100241;  I型胶原蛋白,Northington Biochemical Corporation公司,1 g分装,批号35E8048。

  1.2  动物   昆明小鼠,SPF级,雄性,体质量18~22 g,购于广东省实验动物中心,合格证号2006A017。

  1.3  仪器   上皿电子天平FA2104(上海精密科学仪器有限公司);钻石牌机械秒表(上海星钻秒表有限公司);电动玻璃匀浆机DY89-1型(宁波新之生物科技股份有限公司)。

  1.4  药品、试剂的前处理与配制  血竭溶液:分别称取广西、云南、印尼、龙王、柬龙血竭固体分散体各10 g,再分别称取广西、印尼血竭固体分散体各5 g和2.5 g,共9份,分别加100 mL注射用0.9% NaCl研磨均匀,即得9种不同类型和剂量的血竭溶液。  

  复方丹参片溶液:复方丹参片3片加20 mL注射用0.9% NaCl研磨均匀,即得15 mg/mL丹参混悬液;  地奥心血康溶液:地奥心血康胶囊10粒加100 mL注射用0.9% NaCl研磨均匀,即得甾体总皂甙10 mg/mL地奥混悬液。  

  血小板聚集诱导剂溶液:精密称取Ⅰ型胶原01 mg,加入75 mL的生理盐水,用电动匀浆机冰浴下匀浆4 h,再静置冷藏2 d,临用前1 d,加入20 mL盐酸肾上腺素注射液,摇匀,定容到100 mL,冰箱4 ℃冷藏,避光保存备用。

  2  方法

  2.1  毛细管法测定血液凝聚时间(自改良)  昆明小鼠192只,♂,按体质量分类、随机分组,每组16只,分为NS组、阳性对照组(复方丹参片组0.3 g/kg、地奥心血康胶囊组0.2 g/kg)、不同产地龙血竭固体分散体组(广西血竭组分为0.5 g/kg、10 g/kg、2.0 g/kg低中高三组,印尼血竭组分为05 g/kg、1.0 g/kg、2.0 g/kg低中高三组,云南组20 g/kg,龙王血竭组2.0 g/kg,柬龙血竭组2.0 g/kg);实验设计空白对照组给予0.9%氯化钠溶液,每天按体质量灌胃给药1次,连续给药7 d。  

  末次给药1.5 h后,在17 ℃的空调房间内,用毛细管插入小鼠眼底静脉丛取血,深约4~5 mm,轻轻转动,自血液流入管内按动秒表、开始计时,血液注满后取出毛细管平放于水平台面,每隔10 s向两侧倾斜一次,观察血液流动性,记录出现血液不再流动的时间[4] 。

  2.2  药物对胶原蛋白和肾上腺素诱导血瘀模型小鼠的保护作用[5]  昆明小鼠240只,♂,按体质量分类,随机分组,每组20只,分组同2.1,每天按体质量给药,连续给药7 d。  

  末次给药1.5 h后,小鼠尾静脉注射胶原蛋白和肾上腺素的混合诱导剂,诱发动物血栓性偏瘫甚至死亡,记录注射后10 min内小鼠死亡数,计算恢复率以及存活时间。小鼠10 min内存活计为恢复,恢复率=每组恢复动物数/每组动物数×100% [6,7] ,存活时间≥10 min的,统一记录存活时间为10 min。

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